凝胶排阻层析是根据被分离组分的大小和形状，即样品组分的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖（如葡聚糖或琼脂糖）类物质，使待分离组分按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析（molecular-exclusion chromatography）。