互补测定是研究二个突变是否属于基因的同一功能单位的方法。通过这种测定，能检测出顺反子和互补子。互补测定最早曾由E．B．Lewis（1951）用于果蝇，以后S．Benzer（1957）把这一方法应用于噬菌体，并提出了顺反子的概念。所以这种测定法又称为顺式-反式测定。